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苏州医工所建立水性胶层析改良抗球蛋白试验

2019年03月04日 栏目:育儿

在临床常规的抗体筛检、鉴定以及交叉配血中,要求对具有输血史、妊娠史及输过血的受血者和供血者都应做不完全抗体检测;此外对新生儿溶血病、自身免疫

在临床常规的抗体筛检、鉴定以及交叉配血中,要求对具有输血史、妊娠史及输过血的受血者和供血者都应做不完全抗体检测;此外对新生儿溶血病、自身免疫性溶血病、药物免疫溶血性疾病等诊断中,也都要求常规检测不完全抗体。 抗人球蛋白试验[anti-human globulin(AHG) test or Coombstest,Coombs T]初只用于检测血清中不完全抗体,经过发展后,试管法的Coombs T始用于检测患者体内已经结合了抗体和/或补体的红细胞。但由于抗人球蛋白与血清中致敏红细胞的抗体及血清中游离的免疫球蛋白都能结合,因此在试管法Coombs T时首先要洗涤去除未与红细胞结合的游离免疫球蛋白,再加入抗人球蛋白,以避免抗人球蛋白被反应液中非特异性免疫球蛋白中和而出现的假阴性反应。由此导致其操作繁琐、费时,且一些弱反应抗体不能检出等缺点,难以满足临床血型相容性试验的时间性要求。上世纪90年代出现的微柱凝胶抗人球蛋白试验(microtube gel Coombs test,MG-Coombs T),因为去掉了洗涤程序,才成为了临床常规检测血型不完全抗体的方法;但MG-Coombs T尚存在血液标本中纤维蛋白原易造成假阳性、试剂原材料Sephadex价格高等缺点或问题,此外凝胶卡中的原材料凝胶颗粒多为进口,受少数公司垄断,近年来价格越来越高,间接导致临床检测成本的提高。这就是为什么MG-Coombs T在临床未能进一步广泛推广的原因。

针对这一难题,中国科学院苏州生物医学工程技术研究所李勇研究员所带领的血液免疫学与免疫遗传学课题组建立了水性胶层析改良抗球蛋白试验(HCI-Coombs T)方法,通过将含红细胞和血清的反应液置于水性胶介质试管中,低速离心使红细胞穿过水性胶到达试管底部,而血清中非特异性球蛋白等滞留在水性胶之上,弃去反应液和水性胶介质后加入抗人球蛋白试剂,离心后观察血凝结果(如图)。

采用 HCI-Coombs T 的优势在于,通过低速离心后,红细胞沉降到试管底部,而游离蛋白仍留在水性胶上层,弃去水性胶后即可达到将两者分离的目的,从而代替经典Coombs T中多次洗涤过程,省却了传统试管法孵育后需多次洗涤红细胞的繁琐程序,减少了传统试管法试验可能因为洗涤红细胞不干净而产生的假阴性问题,同时避免了微柱凝胶法中纤维蛋白原以及陈旧标本容易出现的假阳性,具有操作简单快速、准确性高、特异性好、原材料价格便宜等优点;而且水性胶介质的性质受到温度变化影响较小,同时适用于大量标本的高通量检测,此外水性胶介质用途广泛,可用于免疫标记技术(如ELISA、免疫荧光、流式细胞法等)中其他颗粒性抗原抗体复合物的分离。

苏州医工所建立水性胶层析改良抗球蛋白试验

相关结果已发表在2014年《中国输血杂志》第三期上,并被选为封面文章。从各个选择的临床试验机构反馈的信息来看,该诊断试剂检测方法具有简单快速、成本低廉、应用广泛等优点,并得到了临床使用者的认可,目前该研究成果正在进行医疗器械一类产品的注册。

HCI-Coombs T 交叉配血试验示意

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